의약품등 분석법의 밸리데이션에 대한 가이드라인

2004. 11.

의약품평가부

목    차

Ⅰ. 목 적	1

Ⅱ. 서 론	1

Ⅲ. 용어 정의

1. 분석법(Analytical Procedure)	2

2. 특이성(Specificity)	2

3. 정확성(Accuracy)	2

4. 정밀성((Precision)	2

5. 검출한계(Detection limit)	3

6. 정량한계(Quantitation limit)	3

7. 직선성(Linearity)	3

8. 범위(Range)	3

9. 완건성(Robustness)	4

Ⅳ. 분석법 밸리데이션의 실시

1. 특이성(Specificity)	5

가. 확인시험	5

나. 정량시험과 순도시험	6

2. 직선성(Linearity)	7

3. 범위(Range)	8

가. 원료약품 또는 제제의 정량시험	8

나. 함량균일성시험	8

다. 용출시험	8

라. 불순물의 정량시험	9

4. 정확성(Accuracy)	9

가. 정량시험	9

나. 불순물의 정량시험	10

다. 제출자료	11

5. 정밀성(Precision)	11

가. 반복성(병행정밀성, Repeatability)	11

나. 실험실내 정밀성(Intermediate precision)	12

다. 실험실간 정밀성(재현성, Reproducibility)	12

라. 제출자료	12

6. 검출한계(Detection limit)	12

가. 시각적 평가에 의한 방법	12

나. 시그널 대 노이즈에 의한 방법	13

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법	13

라. 제출자료	14

7. 정량한계(Quantitation limit)	14

가. 시각적 평가에 의한 방법	14

나. 시그널 대 노이즈에 의한 방법	14

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 의한 방법	15

라. 제출자료	15

8. 완건성(Robustness)	16

가. 여러 가지의 분석법에 공통되는 변동인자	16

나. 액체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자	16

다. 기체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자	17

9. 시스템적합성 시험(System suitability testing)	17

별표1. 분석법에 따라 검토해야 할 밸리데이션 파라미터	18

I. 목적

이 가이드라인은 식품의약품안전청고시 「의약품등기준및시험방법심사의뢰서심사규정」등 의약품․의약외품의 제조․수입품목허가(신고)신청 및 품질관리를 위하여 필요한 분석법에 대한 밸리데이션 실시방법을 구체적으로 제시함을 목적으로 한다.

II. 서론

의약품등의 분석법에 대한 밸리데이션을 실시하는 목적은 의약품등의 품질관리시험에 이용하는 분석법이 의도한 목적에 적합한 방법임을 증명하는 것이다.

이 가이드라인에서는 각각의 분석법에 관한 밸리데이션 파라미터를 설정하는 방법을 제시하고자 한다. 이 가이드라인에 제시된 밸리데이션이 적용되는 분석법의 범위는 다음과 같다.

1) 화학적 합성의약품등의 원료 규격에 설정된 확인시험

2) 순도시험: 불순물의 정량시험 및 한도시험

3) 정량시험: 원료 또는 제품 중 유효성분, 제품 중 기타 특정 성분의 정량시험, 함량균일성 시험, 용출시험 중 분석법

평가되어야 할 밸리데이션 파라미터는 분석법의 목적에 따라 결정되므로 분석법의 목적이 명확하여야 한다. 밸리데이션 파라미터로는 특이성, 정확성, 정밀성, 검출한계, 정량한계, 직선성, 범위 및 완건성이 있고 각 분석법의 목적에 맞는 밸리데이션 파라미터를 선정하여 평가한다.

한편, 원료약품의 제조방법, 제제의 조성 및 분석법이 변경되는 경우에는 재밸리데이션을 하는데, 변경되는 사항 및 정도에 따라 재밸리데이션 정도가 달라진다.

또한 이 가이드라인에 규정하는 방법이 아닌 다른 밸리데이션 방법을 사용할 수도 있으나 분석법의 목적에 적절한 방법임을 입증하여야 한다.

III. 용어 정의

1. 분석법(Analytical Procedure)

분석을 하기 위해 필요한 상세히 기술된 일련의 시험과정을 말한다. 확인시험, 순도시험, 정량시험 등에 사용된 분석대상물질, 검체, 표준물질, 표준시액, 분석 장비의 사용, 검량선 작성, 계산식의 이용 등을 포함한다.

■ 분석법 밸리데이션(Validation of Analytical Procedure)이란 의약품등의l 품질관리를 위한 분석법의 타당성을 미리 확인하는 과정을 말한다.

■확인시험(Identification Test)이란 검체 중 분석대상물질을 확인하는 시험을 말하며, 일반적으로 검체의 물리화학적 특성(스펙트럼, 크로마토그래프법에서 얻어지는 정보, 화학적 반응성 등)을 표준물질의 특성과 비교하는 방법을 이용한다.

■순도시험(Purity Test)이란 검체 중 유연물질, 중금속, 잔류용매 등 불순물의 존재 정도를 정확하게 측정하는 시험을 말하며 정량시험과 한도시험이 있다.

■함량 또는 효능시험(Assay: Content or Potency)이란 검체 중에 존재하는 분석대상물질의 양 또는 효능을 정확하게 측정하는 시험을 말한다. 즉, 원료 또는 제제 중의 주요성분(주성분, 유효성분, 생리활성성분)이나 특정 성분(예: 안정제 또는 보존제 등 첨가제)의 함량을 측정한다. 용출시험 중의 정량 분석과정도 포함된다.

2. 특이성 (Specificity)

특이성(Specificity)이란 불순물, 분해물, 배합성분 등의 혼재 상태에서 분석대상물질을 선택적으로 정확하게 측정할 수 있는 능력을 말한다.  분석법의 특이성이 부족할 경우 다른 보조적인 분석법으로 보완될 수 있다.

3. 정확성(Accuracy)

정확성(Accuracy)이란 측정값이 이미 알고 있는 참값이나 표준값에 근접한 정도를 말한다.

4. 정밀성(Precision)

정밀성(Precision)이란 균일한 검체로부터 여러 번 채취하여 얻은 시료를 정해진 조건에 따라 측정하였을 때 각각의 측정값들 사이의 근접성(분산정도)을 말한다. 정밀성은 세 가지 다른 조건에서 확인되는데, 반복성(병행정밀성), 실험실내 정밀성 및 실험실간 정밀성이 있다.

■반복성(병행정밀성, Repeatability)이란 동일한 실험실내이서 동일한 시험자가 동일한 장치와 기구, 동일 제조번호와 시약, 기타 동일 조작 조건하에서 균일한 검체로부터 얻은 복수의 시료를 짧은 시간차로 반복 분석 실험하여 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다. Intra-assay precision이라고도 한다.

■실험실내 정밀성(Intermediate Precision)이란 동일 실험실내에서 다른 실험일, 다른 시험자, 다른 기구 또는 장비 등을 이용하여 분석 실험하여 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다.

■실험실간 정밀성(Reproducibility)이란 일반적으로 표준화된 분석법을 사용한 공동연구에 적용되는데, 서로 다른 실험실에서 하나의 균일한 검체로부터 채취한 시료에 대하여 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다.

5. 검출한계(Detection Limit)

검출한계(Detection Limit)란 검체 중에 존재하는 분석대상물질의 검출 가능한 최소량을 말하며, 반드시 정량가능할 필요는 없다.

6. 정량한계(Quantitation Limit)

정량한계(Quantitation Limit)란 적절한 정밀성과 정확성을 가진 정량값으로 표현할 수 있는 검체 중 분석대상물질의 최소량을 말한다.  저 함량의 분석대상물질을 함유한 검체의 정량시험이나 특히 불순물, 분해생성물 결정에 사용되는 정량시험의 밸리데이션 파라미터이다.

7. 직선성(Linearity)

분석법의 직선성(Linearity)이란 실험방법이 일정 범위에 있는 검체 중 분석대상물질의 양 (또는 농도)에 대하여 직선적인 측정값을 얻어낼 수 있는 능력을 말한다.

8. 범위(Range)

범위(Range)란 적절한 정밀성, 정확성 및 직선성을 충분히 제시할 수 있는 검체 중 분석대상물질 양(또는 농도)의 하한 및 상한값 사이의 영역을 말한다

9. 완건성(Robustness)

분석법의 완건성(Robustness)이란 시험방법 중 일부 조건이 소규모라도 의도적으로 변경되었을 때 측정값이 영향을 받지 않는지에 대한 척도를 말한다. 분석법이 통상 사용되는 동안 그 분석법을 얼마나 신뢰할 수 있는 지에 대한 지표이다.

IV.  분석법 밸리데이션의 실시

분석법 밸리데이션을 위해서는 우선 분석법의 적정성에 관한 종합적이고 신뢰성 있는 실험계획을 수립하고 밸리데이션 과정에서 얻어진 모든 데이터 및 밸리데이션 파라미터를 이용하여 그 적정성 여부를 평가한다. 밸리데이션의 과정에서 얻어진 모든 관련 데이터 및 밸리데이션 파라미터를 산출하기 위해 사용된 계산공식이 제출되어야 하며 적절히 설명되어야 한다.  확인시험, 순도시험, 정량시험 등의 분석법별로 설정되어야 할 밸리데이션 파라미터는 별표1과 같다.

밸리데이션 수행 시에 사용하는 표준품은 순도를 포함하여 물리 화학 생물학적 특성이 명확히 설명되어야 한다.  어느 정도 수준의 순도를 가진 표준품이 요구되는지는 분석법의 사용목적에 따른다.

1. 특이성(Specificity)

확인시험, 순도시험 및 정량시험의 밸리데이션에서는 특이성이 평가되어야한다. 특이성을 입증하기 위한 방법은 분석법이 적용되는 목적에 따라 다르다.

어떤 분석법이 특정의 분석대상물질에 대해서 특이적이고, 완벽한 식별성을 가진 방법임을 입증하는 것이 항상 가능하지는 않다. 이러한 경우에는 2개 이상의 분석법을 조합하여 식별이 가능해 질 수 있다.

가. 확인시험(Identification)

확인시험은 구조적으로 유사한 화합물들이 공존시 이를 식별할 수 있는 방법이어야 한다. 분석법의 식별 능력은 분석대상물질을 함유한 검체에서 기존의 표준물질과 비교시 양성의 시험결과를 얻고, 분석대상물질을 포함하지 않은 검체에서는 음성의 시험결과를 얻음으로써 확인할 수 있다. 또한 분석대상물질과 구조적으로 유사한 물질 또는 분석대상물질과 밀접한 관련성이 있는 물질에 확인 시험을 적용하여 양성의 반응을 얻을 수 없다는 것을 확인해도 된다. 특이성 검토 시 분석법을 실시하는데 있어서 일어날 수 있는 방해를 과학적으로 판단하여, 위와 같이 방해를 일으킬 수 있는 물질을 선택하여야 한다.

나. 정량시험과 순도시험

크로마토그래프법에서는 특이성을 입증하기 위한 크로마토그램을 제시해야하며 개개의 성분들이 적절히 표시될 수 있어야 한다. 이는 다른 분리 분석법의 경우에서도 마찬가지이다.

크로마토그래프법에서는 성분이 서로 분리되고 있음을 나타내는 분리한계(Critical Separation)가 평가되어야 한다. 특이성을 나타내기 위해서 서로 가장 근접하게 용리하는 2개 성분의 분리도를 이용하여 분리한계를 나타내도 좋다.

비특이적인 정량시험(non-specific assay)이 사용될 때는 다른 추가적 분석법의 데이터를 제출하여 종합적으로 특이성을 입증한다. 예를 들면, 원료약품의 출하시험으로 실시하는 정량시험에 적정법(titration)이 적용되는 경우에는 그 정량시험에 적당한 순도시험을 실시하여 검토함으로써 특이성을 증명할 수 있다.

정량시험과 순도시험에서 특이성을 입증하기 위한 방법은 동일하다.

1) 유연물질 표준품 보유 시

불순물 또는 의약품첨가물이 공존하는 상황에서 정량시험은 분석대상물질에 특이적이어야 한다. 실제로 원료약품 또는 제제에 적당한 농도의 불순물이나 의약품첨가물을 첨가했을 때의 정량 시험결과가 이러한 물질이 첨가되지 않을 때의 시험결과와 비교하여 영향을 받지 않는다는 것을 보여줌으로써 특이성을 입증할 수 있다.

순도시험에서는 원료약품 또는 제제에 적당한 농도의 불순물을 첨가하여 이들 불순물이 서로 분리되거나 불순물이 검체 중에 존재하는 다른 성분으로부터 분리되는 것을 제시함으로써 특이성을 입증할 수 있다.

2)　유연물질 표준품 미보유시

불순물 또는 분해생성물의 표준품을 확보할 수 없는 경우에는 불순물 또는 분해생성물을 포함한 검체에 대하여 계획한 분석법으로 측정한 결과와 밸리데이션 파라미터를 이미 알고 있는 다른 분석법(second well-characterized procedure)으로 측정한 결과를 비교함으로써 특이성을 입증할 수 있다. 여기서 밸리데이션 파라미터를 이미 알고 있는 분석법의 예로는, 약전에 기재된 방법 또는 기타 이미 밸리데이션되어 있으나 밸리데이션하려는 분석법과는 전혀 다른 분석법이 있다. 필요에 따라서, 불순물 발생이 가능한 가혹조건(빛, 열, 습도, 산 또는 염기 가수분해 및 산화)에 노출된 검체를 이용할 수도 있다.

․정량시험에서는 2 개의 정량 시험결과를 비교한다.

․순도시험에서는 불순물 프로파일을 비교한다.

크로마토그램상의 분석대상물질의 피크가 다른 성분들로부터 유래하지 않는다는 것을 입증하기 위해서는 다이오드 어레이(Diode array)나 질량분석기(MS) 등을 검출기로 이용하는 피크순도시험이 유용하다.

2. 직선성(Linearity)

「3. 범위」에 서술되는 분석법의 모든 범위에서 직선성을 확인한다. 표준원액을 희석하여 원료약품의 각 농도에 대해서 직접적으로 직선성을 증명하거나 제제성분의 혼합물에서 각각 성분의 중량별로 분리하여 직선성을 증명할 수 있다. 혼합제제의 경우는 범위(Range) 검토시 평가될 수도 있다.

시그널을 분석대상물질의 농도 또는 함량에 대한 함수로 작성한 플롯을 시각적으로 검사하여 직선성을 평가한다. 직선성이 인정되는 경우에는, 최소 이승법에 의한 회귀 직선의 계산과 같은 통계학적 방법을 이용해 측정 결과를 평가한다. 분석 실측치와 검체농도의 직선성을 얻기 위해서 필요시 회귀분석을 하기 전에 측정 데이터를 수학적으로 변환시킬 필요가 있을 수 있다. 회귀직선으로부터 얻을 수 있는 정보는 직선성의 정도를 수학적으로 평가할 때 도움이 된다.

상관계수(correlation coefficient), y－절편, 회귀직선의 기울기 및 잔차제곱의 합(residual sum of square)을 첨부자료에 기재한다. 데이터에 대한 플롯도 첨부자료로 제출한다. 실측치와 회귀직선상의 예측치와의 차이를 분석하는 것도 직선성을 평가하는데 있어서 도움이 된다.

면역측정법(Immunoassay)과 같이 어떤 분석법은 수학적 변환을 하여도 직선성이 나타나지 않는다. 이러한 경우, 분석결과는 검체중의 분석대상물질의 농도(또는 함량)에 대하여 적절한 함수(이론식 또는 근사식)로 표현한다.

직선성을 입증하기 위해서는 적어도 다섯 개 농도의 검체를 사용한다. 그렇지 않은 경우 그 방법의 타당성에 대한 근거를 제시하여야 한다.

3. 범위(Range)

일반적으로 범위(Range)는 직선성 평가 시 결정되고, 분석법이 적용되는 목적에 따라 달라질 수 있다. 규정하는 범위 내 또는 그 범위의 양단의 농도를 포함한 검체를 이용하여 분석법의 직선성, 정확성 및 정밀성을 확인함으로써 범위의 타당성을 입증한다.

최소로 규정하는 범위는 다음과 같다.

가. 원료약품 또는 제제의 정량시험

일반적으로 시험농도의 80～120%.

나. 함량균일성시험

정량분무흡입제(metered dose inhalers)등과 같이 제형의 특성에 근거하여 더 넓은 범위를 규정하여야 하는 경우를 제외하고는, 적어도 시험농도의 70～130%.

다. 용출시험

제제의 기준 및 시험방법 중 설정된 용출시험기준 범위의 ±20%.

예를 들어, 방출제어제제의 규격이 1시간 후에 20%, 24시간 후에 90%라고 규정되어 있다면 밸리데이션해야 할 범위는 표시량의 0～110%이다.

라. 불순물의 정량시험

불순물에 대하여 설정된 기준의 120%

작용이 특히 강하거나 독성 및 예기치 못한 약리 작용을 나타내는 것으로 알려진 불순물의 검출/정량 한계는 그 불순물이 관리되어야 할 한도를 고려하여 설정되어야 한다. 의약품등의 개발 단계에서 행해지는 순도시험에 이용되는 분석법을 밸리데이션하는 경우, 예측되는 불순물의 한도치 근처를 범위로 하여 평가하는 것이 좋다.

마. 유효성분의 정량법과 순도시험이 하나의 시험으로 동시에 행해져 유효성분 표시량의 100%를 함유한 검체만 사용되는 경우, 불순물로 보고된 역치 ～ 유효성분 표시량의 120%.

4. 정확성(Accuracy)

정확성은 분석법이 규정하는 모든 범위에서 입증되어야 한다.

가.　정량시험

(1) 원료약품

정확성을 결정하기 위해서 다음과 같은 몇 가지의 방법을 이용할 수 있다.

(가) 참값을 알고 있는 경우

순도를 이미 알고 있는 분석검체(예를 들면, 표준품)에 대해서 밸리데이션하려 하는 분석법을 적용한다.

(나)　정확성이 알려진 기존의 분석법이 존재하는 경우

밸리데이션하려 하는 분석법에 의한 시험결과와 정확성이 알려진 기존의 분석법에 의한 시험결과를 비교한다.

(다)　정확성은 정밀성, 직선성 및 특이성을 입증함으로써 추론할 수 있다.

(2)　제제

정확성을 평가하기 위하여 다음과 같은 몇 가지의 방법을 이용할 수 있다.

(가) 제제성분의 혼합물에 분석하는 원료약품의 기지량(이미 알고 있는 양)을 첨가하고 이것을 검체로 하여 밸리데이션하려 하는 분석법을 적용한다.

(나) 확보 불가능한 제제성분이 있는 경우에는 다음의 어느 방법을 이용해도 좋다.

1) 제제에 기지 량의 분석대상물질를 첨가하는 방법

2) 제제를 밸리데이션하려 하는 분석법으로 측정한 결과와 정확성이 알려진 기존의 분석법으로 측정한 결과를 비교하는 방법

(다)　정확성은 정밀성, 직선성 및 특이성을 입증함으로써 추론할 수 있다.

나. 불순물의 정량시험

정확성은 기지량의 불순물을 첨가한 원료약품 또는 제제 등의 검체를 정량함으로써 평가한다.

특정 불순물 또는 분해생성물을 확보하는 것이 불가능한 경우에는 밸리데이션하려 하는 분석법에 의한 시험결과를 정확성이 알려진 기존의 분석법에 의한 시험결과와 비교해도 된다. 원료약품의 반응계수(response factor)를 이용할 수도 있다.

모든 경우 주요 분석대상물질에 대하여 중량백분율 혹은 면적백분율 등 개개의 불순물 양 또는 불순물 총량의 결정방법을 기재해 두어야 한다.

다. 제출자료

정확성은 규정된 범위를 포함하여 최소한 3 농도에 대해서 분석법의 전 조작을 적어도 9회 반복 측정(예를 들면, 3 농도에 대해서 분석법의 전 조작을 각 농도당 3회씩 반복 측정)한 결과로부터 평가한다.

정확성은 기지량의 분석대상물질을 첨가한 검체를 정량하는 경우에는 회수율(%)로서 나타내고, 참값과 비교하는 경우에는 평균값과 참값으로 인증된 값과의 차이를 신뢰구간과 함께 기재한다.

5. 정밀성(Precision)

함량시험 및 불순물의 정량시험을 밸리데이션할 때 정밀성 평가가 포함된다.

가. 반복성(병행정밀성, Repeatability)

반복성은 다음과 같은 방법으로 평가할 수 있다.

(1) 규정된 범위를 포함한 농도에 대해 분석법의 전체 조작을 적어도 9 회 반복하여 측정한다(예를 들면, 3 농도에 대해서 분석법의 전 조작을 각 농도 3 회씩 반복 측정한다.)

(2) 시험농도의 100 %에 해당하는 농도로 분석법의 전 조작을 적어도 6 회 반복 측정한다.

나. 실험실내 정밀성(Intermediate precision)

실험실내 정밀성의 평가범위는 분석법이 사용되는 상황에 따라 정해진다. 밸리데이션 승인을 신청하는 경우 분석법의 정밀성에 미치는 여러 가지 요인에 대한 영향을 확인할 필요가 있다. 평가가 필요한 대표적인 변동요인은 실험일, 시험자, 시험장치 등이다.

다. 실험실간 정밀성(재현성, Reproducibility)

재현성은 실험실간 실험(inter-laboratory trial)에 의해 평가된다. 약전에 분석법을 수재하는 등 분석법을 표준화할 필요가 있을 경우에는 재현성의 평가가 필요하다.

라. 제출자료

각 형태의 정밀성 평가 자료마다 표준편차, 상대표준편차(변동 계수) 및 표준편차의 신뢰구간을 기재한다.

6. 검출한계(Detection limit)

분석법이 기기분석인지 아닌지에 따라 검출한계를 구하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용 가능하다. 따라서 다음에 제시하는 방법 이외의 다른 방법을 이용할 수도 있다.

가. 시각적 평가에 근거하는 방법

기기를 사용하지 않는 분석법 뿐 아니라 기기 분석법에 대해서도 시각적으로 평가 할 수 있다.

검출한계는 기지량의 분석대상물질을 함유한 검체를 분석하고 그 분석대상물질을 확실히 검출할 수 있는 최저의 농도를 확인함으로써 결정된다.

나. 시그널(signal) 대 노이즈(noise)에 근거하는 방법

이 방법은 베이스라인 노이즈가 출현하는 경우의 분석법에 적용한다. 시그널 대 노이즈 비는 기지의 저농도 분석대상물질을 포함한 검체의 시그널과 공시험 검체의 시그널을 비교하여 구하고, 일반적으로 3～2：1의 시그널 대 노이즈비가 산출되는 분석대상물질의 최저 농도가 검출한계가 된다.

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법

검출한계(DL)를 다음 식에 의해 결정할 수 있다.

DL = 3.3 * σ／S

여기서 σ는 반응의 표준편차를, S는 검량선의 기울기를 말한다.

기울기 S는 분석대상물질의 검량선으로부터 산출할 수 있다. 표준편차 σ에 대해서는 다음과 같은 여러 가지 산출 방법이 있다.

(1) 공시험 검체의 표준편차에 근거하는 방법

적당한 수의 공시험 검체를 분석하여 이 측정값의 표준편차를 계산함으로써 분석법의 기본(background) 반응 정도를 측정한다.

(2) 검량선에 근거하는 방법

검출한계내에 있는 분석대상물질을 포함한 검체를 사용하여 특이적인 검량선을 작성한다. 회귀직선에서 잔차의 표준편차(residual standard deviation) 또는 회귀직선(regression line)에서 y 절편의 표준편차를 표준편차 σ로서 이용할 수 있다.

라. 제출자료

검출한계와 함께 검출한계를 구할 때 사용한 방법을 첨부자료에 기재한다. 시각적 평가 또는 시그널 대 노이즈 비에 의해 검출한계를 결정할 경우에는 그 타당성을 입증할 수 있는 크로마토그램을 제출한다.

계산(calculation) 또는 외삽(extrapolation)에 의해 검출한계를 산출하였을 경우에는 적당한 수의 검출한계 농도 혹은 그 부근 농도의 검체에 대한 분석을 실시하여 제출값의 타당성을 입증한다.

7. 정량한계(Quantitation limit)

분석법이 기기분석인지 아닌지에 따라 정량한계를 구하기 위해서 여러 가지 방법들이 사용 가능하다. 따라서 다음에 제시하는 방법 이외의 다른 방법을 이용할 수도 있다.

가. 시각적 평가에 근거하는 방법

기기를 사용하지 않는 분석법 뿐 아니라 기기 분석법에 대해서도 시각적으로 평가 할 수 있다.

정량한계는 기지농도의 분석대상물질을 함유한 검체를 분석하고 그 분석대상물질을 인정될 수 있는 정도의 정확성과 정밀성을 가지고 정량될 수 있는 분석대상물질의 최저농도를 확인함으로써 결정된다.

나. 시그널(signal) 대 노이즈(noise)에 근거하는 방법

이 방법은 베이스라인 노이즈를 수반하는 분석법에만 적용할 수 있다. 시그널 대 노이즈 비는 기지의 저 농도 분석대상물질을 포함한 검체의 시그널과 공시험 검체의 시그널을 비교하여 구하고, 일반적으로 10:1의 표준적 시그널 대 노이즈 비를 확실하게 정량할 수 있는 분석대상물질의 최저의 농도가 정량한계가 된다.

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법

정량한계(QL)는 다음 식에 의해 결정할 수 있다.

QL = 10 * σ／S

여기서 σ는 반응의 표준편차를, S는 검량선의 기울기를 말한다.

기울기 S는 분석대상물질의 검량선으로부터 구할 수 있다. 표준편차(σ)에 대해서는 여러 가지의 측정방법이 있고 그 예는 다음과 같다.

(1) 공시험 검체의 표준편차에 근거하는 방법

적당한 수의 공시험 검체를 분석하여 이 측정값의 표준편차를 계산함으로써 분석법의 기본(background) 반응 정도를 측정한다.

(2) 검량선에 근거하는 방법

정량한계내에 있는 분석대상물질을 포함한 검체를 사용하여 특이적인 검량선을 작성한다. 회귀직선에서 잔차의 표준편차(residual standard deviation) 또는 회귀직선(regression line)에서 y 절편의 표준편차를 표준편차 σ로서 이용할 수 있다.

라. 제출자료

정량한계와 함께 정량한계를 구할 때 사용한 방법을 첨부자료에 기재한다.

정량한계 혹은 그 부근 농도로 조제된 적당한 수의 검체에 대하여 별도 분석함으로써 정량한계가 타당함을 입증한다.

8. 완건성(Robustness)

완건성은 분석법을 개발하는 단계에서 평가되어야 하며, 그 평가방법은 개발하려고 하는 분석법의 형태에 따라 다르다. 완건성은 분석조건을 고의로 변동시켰을 때의 분석법의 신뢰성을 나타낸다.

만약, 측정값이 분석조건 변경에 따라 영향을 받기 쉬운 경우라면, 분석조건을 적절히 조정하던지 분석법 중에 사전 조심 문구를 포함시킬 필요가 있다. 완건성을 평가함에 따라 시스템적합성에 관한 일련의 파라미터(예를 들면, 분리도)를 확립할 수 있다. 이러한 파라미터를 확인함으로써 일상의 분석에서 분석법의 타당성이 유지되고 있음을 보증할 수 있다.

대표적인 변동인자는 다음과 같다.

가. 여러 가지의 분석법에 공통되는 변동인자

․시험용액의 안정성

․추출시간

나. 액체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자

․이동상의 pH

․이동상 조성(composition)의 변경

․컬럼의 변경(different lots or suppliers)

․온도

․유속

다. 기체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자

․컬럼의 변경(different lots or suppliers)

․온도

․유속

9. 시스템적합성 시험(System suitability testing)

시스템적합성 시험은 많은 분석법의 통합체이다. 이 시험은 시험장치, 전자공학적 기술, 분석조작 및 분석대상물질 등의 조합이 완결된 시스템을 구성하고 있고 그 시스템 상태로 평가되어야 된다는 생각을 근거로 하여 실시된다. 분석법에 대해 확립해야할 시스템적합성의 파라미터는 분석법의 형태에 따라 다르다. 세부적인 사항은 약전을 참조한다.

별표 1)

분석법에 따라 평가해야 할 밸리데이션 파라미터

분석법 종류 밸리데이션 파라미터	확인시험	순도시험 정량시험 한도시험	정량시험 -용출시험(중 정량시험에 한함) -함량시험/효능시험
정확성 정밀성 반복성 실험실내 정밀성 특이성(2) 검출한계 정량한계 직선성 범위	- - - + - - - -	+ - + - +(1) - + + -(3) + + - + - + -	+ + +(1) + - - + +

- 일반적으로 평가할 필요가 없는 것

+ 일반적으로 평가가 필요한 것

(1) 실험실간 정밀성(재현성, Reproducibility)이 평가되는 경우 실험실내 정밀성 (Intermediate precision)은 필요하지 않음

(2) 한 가지 분석법으로 특이성을 입증할 수 없는 경우 다른 분석법을 추가로 사용하여 특이성을 입증할 수 있음

(3) 필요시 설정